CCK8實驗是一種基于比色法的細胞增殖和毒性檢測方法，廣泛應用于藥物篩選、細胞活力評估等領域。其實驗原理是通過WST-8試劑與活細胞線粒體脫氫酶反應生成水溶性橙黃色甲臜，其生成量與活細胞數(shù)量成正比，通過檢測450 nm波長處的吸光度（OD值）間接反映細胞活性。

實驗步驟（以96孔板為例）：

1. 細胞接種：將對數(shù)生長期的細胞以適當密度（如4×103~6×103個/孔）接種至96孔板，確保均勻分布。

2. 藥物處理：根據(jù)實驗設計加入不同濃度的藥物或待測物質(zhì)，設置對照組（如wan全培養(yǎng)基）和復孔（通常3個/組）。

3. 孵育：在37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中孵育特定時間（如24~72小時），部分實驗需中途更換培養(yǎng)基。

4. 添加CCK8試劑：每孔加入1/10體積的CCK8溶液（如10 μL），避光孵育1~4小時（時間需優(yōu)化）。

5. 檢測OD值：使用酶標儀在450 nm波長處測定吸光度，記錄數(shù)據(jù)并繪制生長曲線。

注意事項：

• 試劑保存：CCK8試劑需避光保存于4℃，避免反復凍融；含強還原劑（如維生素C）的培養(yǎng)基可能干擾結(jié)果。

• 操作規(guī)范：加入試劑后避免晃動培養(yǎng)板，防止細胞脫落；確保細胞充分貼壁且密度適中。

• 標準化：建議預先繪制標準曲線，校準細胞數(shù)量與OD值關系，并控制孵育時間以提高重復性。

• 數(shù)據(jù)解讀：需結(jié)合統(tǒng)計分析（如t檢驗或ANOVA），關注藥物濃度與細胞活力的相關性，并排除實驗干擾因素。